【产品名称】
    药敏改良罗氏培养基（比例法）
【产品用途】
    主要用于检测临床或实验室分离出的结核分枝杆菌，对抗结核一线药异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素的敏感性情况；
【主要成分】
    本产品的主要成分是谷氨酸纳、磷酸二氢钾、 硫酸柠檬酸镁、丙三醇、新鲜鸡卵液、 2％孔雀绿水溶液以及抗结核菌抗生素，抗生素分别是异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）、链霉素（SM）；
【实验原理】
    本产品主要利用比例法进行分枝杆菌药敏性实验。取液体培养基或固体培养基培养阳性的分枝杆菌，调整一定浓度，分别接种到不同药敏培养基中，37℃培养4周，如果空白对照培养管中，结核菌生长良好，进行下一步结核菌药物敏感性鉴定；如果结核分枝杆菌在空白对照培养管没有生长，需要重新实验。
药物敏感性鉴定：37℃培养4周后，观察结果并计算耐药百分比：

  如果耐药百分比< 1％ 者报告敏感（S）；耐药百分比≥1％者报告耐药（R）；
【仪器设备】
    本实验需要主要的仪器设备有生化培养箱、生物安全柜、接种环、麦氏比浊管（No.1）、移液枪（或移液管）、高压灭菌锅；
【操作方法】
 1、菌液浓度标定及接种菌液的准备：
 1.1 样品来源于液体培养基：
       液体培养基分离培养结核分枝杆菌阳性或复苏培养的结核分枝杆菌，取培养2周以内菌液，经4000g，15分钟离心，取沉淀。沉淀用无菌0.5％Tween80生理盐水稀释，与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）比浊，即配成1mg/mL的菌悬液；
 1.2 样品来源于固体培养基：
       挑取固体培养基上培养的结核分枝杆菌菌落，利用无菌的0.5％ Tween80生理盐水溶解、稀释，与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）比浊，即配成1mg/mL的菌悬液；
 附：麦氏1号比浊管的制备方法：
       0.1mL 1％氯化钡（BaCL₂）加入9.9mL 1％硫酸（H₂SO₄），封口，比浊前摇匀。
 1.3 菌悬液稀释制备接种浓度：
       比浊后的菌悬液， 利用无菌的 0.5％ Tween80 生理盐水10 倍比稀释， 稀释到接种浓度分别为： 10^-2mg/mL和10^-4mg/mL；
提示：
 ① 此操作要求在生物安全柜中进行；
 ② 菌液标定稀释前，要保证菌样没有污染，如果菌样中含有除了结核分枝杆菌，还存在其他抗酸菌，药敏结果不准确；
 ③ 样品来源于固体培养基，结核分枝杆菌最好是在培养基上出现阳性克隆后，14天内挑取，进行药敏实验；
 ④ 0.5％Tween80生理盐水使用前，需要高压灭菌；
 2、接种：
    接种浓度分别为10^-2mg/mL和10^-4mg/mL，标准接种环取0.01mL，分别接种到对照培养基及含药培养基表面；
 提示：
    接种菌液尽可能均匀分散于培养斜面上；
 3、培养：
    接种后的培养基置于斜面处37℃培养，松开盖子，培养24～48h后，旋紧盖子继续培养，培养4周；
    4周后，当对照培养管的菌体生长良好后，进行下一步菌体药物敏感性鉴定，报告结果；如果对照培养管菌体没有生长，重新实验；
【结果判定】
    菌液接种药敏培养基，37℃培养4周后，
 （1）观察培养结果：
 ① 无菌落生长：对药物敏感 —
 ② 少于50个菌落：实际菌落数；
 ③ 50～100菌落： 1＋
 ④ 100～200个菌落： 2＋
 ⑤ 大部分融合
    （200～500个菌落） 3＋
  ⑥ 融合（大于500个菌落） 4＋
    （2）计算耐药百分比：

  如果耐药百分比大于1％者报告耐药；则认为受试菌对该抗结核药耐药；
提示：
    若高稀释度菌液（10^-4mg/mL）在对照培养基上生长的菌落数少于20个菌落，则应从对照管传代培养，重复实验。
【注意事项】
 1、生物安全方面注意事项：
 ① 结核分枝杆菌操作要在无菌室中进行；
 ② 操作人员需进行特殊的培训，操作时，注意自身安全，防止实验操作过程中，结核菌感染；
 ③ 使用后的带有结核菌的器材，随时收集，实验结束后，灭菌处理；
 ④接种操作，严格按照无菌操作；
 2、产品使用方面注意事项
 ① 本产品仅用于结核分枝杆菌药物敏感性实验鉴定用，
 ② 本品在指定的保存方法下保存；
 ③ 超过有效期的产品禁止使用；
     产品如果有污染，禁止使用；
 ④ 在本品为无菌产品，在无菌环境下，开封后即时使用；
 3、废弃物处理：
 ① 菌体接触过的器材或废弃液体，均需121℃，高压灭菌20min后，方可丢弃；
 ② 实验操作后，操作台用3％苯酚或其他可靠消毒液擦拭后，再用紫外灯照射30min；
【贮存方法·有效期】
    2～10℃保存，有效期4个月
【包装规格】
    24支×1盒
    每盒包装两套药敏培养基，每套有两组，共24支。每套包括：

【产品标准编号】
    YZB/浙 0865-2005
【注册号】
    浙食药监械(准)字2005第2400263号
【企业许可证号】
    浙 药管械生产许 20040074 号
【生产企业】
    杭州创新生物检控技术有限公司
【注册地址】
    浙江省杭州市经济技术开发区（下沙）10号大街（东）139号
【生产地址】
    浙江省杭州市经济技术开发区（下沙）10号大街（东）139号
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